作者keepseaching (绝心忘情)
看板Biotech
标题[求救] Ligation的cutting site接近
时间Wed Nov 3 02:19:43 2010
我在进行的实验是将一段A基因约1kb
接入pCambia2301这个vector约13kb
所用的cutting site为BamHⅠ与XbaⅠ
所用的条件如下
Insert 10μl
Vector 4μl
bufferA 2μl
bufferB 2μl
Ligase 2μl 4℃反应overnight
做了数次却接不起来
基本上我的A基因与vector都check过了
所以我在猜想
是否是因为我选用的这两个cutting site相邻
导致用酵素切的时候没办法两端都切
不知版上有经验的版友
有没有遇过类似的问题
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 218.35.25.28
1F：→ chaunen:网路上似乎也有人用相同的cutting site. 11/03 02:43
2F：→ chaunen:你可能要check一下 vector和inser的浓度. 放个1：10黏看看 11/03 02:44
3F：→ chaunen:如果是益生的ligase system bufferB 似乎是加强blunt end 11/03 02:45
4F：→ chaunen:毕竟size相差有点大.. 11/03 02:47
5F：→ chaunen:所以inser可以考虑多放点... 11/03 02:48
6F：→ chaunen:室温ligation 2hr, 可以多做一组+0.5ul 10mM ATP 看看 11/03 02:50
7F：→ keepseaching:谢谢 11/03 19:37