作者lail (逃避不是办法阿)
看板Biotech
标题Re: [求救] 用PCR clone promoter
时间Sat Oct 30 14:22:02 2010
想请问你有没有测试过primer可不可用？又是不是一开始就利用Pfu进行PCR？
我之前的经验是Pfu的PCR效率比较不好，
所以要先确定primer可用与否可以先用Taq或其他效率比较好的enzyme测试
如果确定primer可以用，改回用Pfu时，可能又会发生得不到产物的现象
我之前的经验是把template DNA (genomic DNA)的浓度降低，
或是在PCR mixture中加入DMSO，就可以得到产物了。
看到产物之後再来调整annealing 温度等等，
让所想要的片段可以更容易获更精准备制造出来
一点点小小的个人经验
希望能提供帮助^^
※ 引述《roger3112 (我想休息...)》之铭言：
: 小弟我最近要用PCR将一段genomic DNA中一段promoter clone出来
: 但是之前试了很多condition都没有办法(温度，浓度)，
: 想要请教板上有没有高手做过这种实验，可以跟我说一下大概要注意什麽吗?
: 我想要clone出来的长度大概是2Kb左右
: 感谢!!!
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