作者eatofy (平常心)
看板Biotech
标题[求救] western blot transfer大问题
时间Sat Oct 30 00:29:17 2010
最近跟同学一直在做WB 但却都一直鬼打墙
我适用 湿转置 BIO RED系统
transfer buffer使用前都会先滴定ph8.3附近 冰在4度
我夹片的顺序是
菜瓜布 滤纸x2 gel membrane 滤纸x2 菜瓜布
定电流400mA 90min on ice
每次都是按造上面的流程
但 诡异的事情来了
当我跟我同学一起转置的时候 通常两片gel都会顺利转过
marker清楚的在membrane上
当我一个人只有转置一片的时候 也都会成功
marker清楚的在membrane上
但是 当我一次转两片时 『有时候』 两片都会成功转过
但有时候只有一片转过
另一片会出现marker不在gel, 滤纸或是membrane上＝＝
（都是transfer一结束就马上取出，不会泡在buffer李太久）
硬着头皮去压片 也压不出什麽东西来 非常的乾净（actin都没有）
至於染胶 是还没用comassive blue染（心力憔悴）
只是真的想不透这到底是什麽问题 会让这样的状况 很随机的出现
想请问一下大家
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 120.126.71.89
1F：→ singren:会不会是电流量不够?? 1平方公分以25mA算 两片的话可能电 10/30 00:45
2F：→ singren:流量应该不只需要900mA而已吧~ 10/30 00:46
3F：推 mattmatt:电流不够或transfer机器有问题 看有没有接触不良or没夹紧 10/30 04:02
4F：→ alulu:该不会是『有时候』其中一片方向放反了...XD 10/30 09:08
5F：→ eatofy:我有每次都有注意 有每有放反耶 应该不是这问题 10/30 18:14
6F：→ eatofy:我们家的POWER定电流最高只到400＝＝ 10/30 18:15
7F：→ eatofy:我跟同学讨论也有可能是夹不紧 可是每次感觉都有固定好 10/30 18:16
8F：→ eatofy:但有在考虑下次用橡皮筋 绑起来TRANSFER 10/30 18:17
9F：→ eatofy:不晓得有没有人用过这个方法 很怕用橡皮筋又出现什麽问题 10/30 18:18
10F：→ chvkimo:有用过象皮筋绑 ok的 10/30 18:45
11F：→ eatofy:这样就安心一点了 下次来试试 10/30 20:51
12F：推 alaric:您用PVDF membrane? 没做前处理吧. 10/31 13:01
13F：→ eatofy:有用METH浸泡5MIN 10/31 15:08
14F：推 nymph:buffer我记得pH本来就差不多在8.3附近 而不需要去调 11/01 21:25