作者DanteDevil (丹特)
看板Biotech
标题[求救]Cell replate 细胞阵亡
时间Mon Oct 25 14:50:05 2010
各位前辈好!
在下最近在学习神经细胞的replate实验
我的protocol大约是这样:
先Agg/RA 4天
-> culture dish
用预热过的poly-L-lysine coating过10min(用於replate)
把Agg的细胞加入trypsin 2ml
然後Pipeting 5 下打散
-> shake 1min
-> 再Pipeting 5下
->加入media中和trypsin
->Pipeting 5下 然後离心1000rpm 3min
->数细胞
-> Pass 5.6x10六次方到100mm culture dish中
-> replate 後 1天(replate D1)加入ara-c 以抑制glial cell的形成
-> replate 後 2天(replate D2)换成不含ara-c的fresh media
-> 之後每2天换一次fresh media
-> replate D6的时候收protein
但是我发觉每次的Agg cell都没有很圆
然後我的replate cell 之後都死很多细胞(很多都飘起来)
难道是我的Poly-L-lysine coating得不够吗?
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