作者giooy ()
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标题[求救] E. coli蛋白质表现
时间Wed Oct 13 23:10:41 2010
各位高手好，小弟想请教几个问题
我现在用E. coli BL-21这支expression host表现plasmid pET-28a
使用IPTG-induction，因为实验室没有人做过我insert的基因的相关资料
所以养到O.D.=0.4~0.6时加入IPTG，大概培养多久时间收?
第二个问题是现在不知道蛋白质表现会在细胞哪个部位?
不太可能是胞外蛋白，有可能是胞内可溶性或inclusion body或membrane protein
我想先把表现完的菌液先离心，上清留存，pellet回溶，但是不知道用哪种buffer?
接下来应该是一步一步离心，收pellet和supernatant
详细的步骤请教有经验的高手，拜托大家了，感谢!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 111.249.183.206
1F：推 tsubasawolfy:read the pET manual book plz 10/13 23:48
2F：推 TOTO:你是该看看手册,另每种蛋白质性质歧异很大,表达参数也差很大 10/14 02:14
3F：→ TOTO:你得自己在这边做功课去找你的蛋白最佳解,别人给不了答案的 10/14 02:14
4F：→ biingru:你是用 BL21 还是 BL21(DE3)? 10/14 09:48
5F：推 hangzer:这种表现蛋白质的问题应该要自己是条件 别人用的条件不一 10/14 15:51
6F：→ hangzer:定适合你的蛋白质 可以看你们实验室之前用的条件 自己再慢 10/14 15:52
7F：→ hangzer:改 10/14 15:52
8F：→ yuka16830:molecular cloning可以参考看看 有测试条件的protocol 10/17 11:14
9F：推 alaric:1.请做对照组比较, 2.最适反应条件自己抓, 可参考别人的. 10/19 04:16
10F：→ alaric:3.请把你构筑的目的看懂, 还有你的合成蛋白有无Target Seq. 10/19 04:17