※ 引述《Feting ( ><>J <>< し<><)》之铭言： : 小弟是理工背景实验室的同学 : 最近需要使用白血球进行实验 : 加了heparin的血液，用3000rpm、4度c、离心15分钟(没有使用ficoll) : 之後可以看出血液的分层 : 但是却不知道要如何将buffy coat从血液中抽出来 : 其实我也不是很确定我以为是buffy coat的东西到底是不是buffy coat : 应该是离心後中间那层很薄的灰白色层吧? : 想请问各位前辈有甚麽方法可以将buffy coat给分离出来 : 另外，buffy coat分离出来是甚麽样的状态? : 是液体，还是一片胶状的东西? : 因为看到某处的操作说明说buffy coat如果够坚固的话，可以将整片buffy coat挑起 : 由於实验室的学长姐也没使用过白血球做实验，对这些实在不清楚 : 希望各位前辈可以给予指教 : 谢谢 还是回文好了 因为我也只有课程实验做到，所以就我知道的跟你说 先问一下，3000rpm会不会太多o.o 没有用ficoll的话..一般来说就是先拿滴管吸掉plasma 然後你再用一个滴管..尽量少吸到下面的红血球，把整个buffy coat尽量收满 buffycoat就是血浆下层，红血球上面很薄的一层白白的 只是因为离心的关系，让你的不同密度的细胞，分离在小小的地方 因为你没有ficoll..离心完之後更要小心轻轻操作，太强的晃动你会让它分离层又乱掉 收满之後一般来说都会再做处理，或许是用一些lysis buffer(有很多种..但是目的都是 把RBC 溶掉..但是要避免让你的白血球溶掉) 或许也只是就是多用PBS洗过几次尽量少一点红血球在里面 有错请更正 我觉得就算是我们本科系的，要麻就是follow以前实验室的protocol 要不然一开始尝试，建议..跟着你的reference的protocol先做 以後想改再改.. 要不然就是找类似实验室看看人家的protocol怎麽做 --

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