作者miwy (孤独何缘)
看板Biotech
标题Re: [求救] 细胞污染
时间Thu Oct 7 09:06:54 2010
※ 引述《miwy (孤独何缘)》之铭言：
: 1.
: 这几个礼拜都在挑stable clone
: transfection後细胞跟medium里都会出现黑黑的颗粒
: 黑色颗粒会黏附在细胞上 然後有些会飘在medium中
: 而且通常是很大一坨
: 但细胞不太会死
: 只送空的vector进去又不会出现
: 是单纯送进去的gene表现造成的结果吗?
因之前细胞真的被细菌污染了= =整个臭掉 所以又重做一批
然後想说DNA是不是有点问题
所以过了一次filter
只是这次更傻眼
再配mix的时候就出状况了= =
我的步骤:
补水 +plasmid +CaCl2 +BBS
照上面的顺序加 结果加完BBS整管看的到里面有白白的混浊物
然後测试过水+CaCl2+BBS
水+CaCl2(不同批的)+BBS 都没出问题
然後上面测试用的一加我的plasmid 就又浊掉了
因为有一管我没注意到所以就先加到细胞里了
结果在显微镜下观察 就出现之前的状况 会有一堆颗粒黏附在细胞上
所以我想可以确定不会是细胞或DAN表现的问题
但是会这样子应该是我的溶DNA的溶液有问题吧
我应该用酒精沉淀吗?还是说重抽一批???
因为之前要等到加入後的一天才会有颗粒出现 可是这是却是在混合的时候就出现了?
所以也想请问为什麽会有这样的状况出现?
从上次到现在这次中间只过一次filter plasmid没有做过其他处理
感谢T口T
--
╭ ╮ 在泪水蜿蜒後
● ● ζ
ξ 我独
自欣赏孤独
●- ζ
（ν
▌ █λ █ miouya █ █
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.130.159
※ 编辑: miwy 来自: 140.112.130.159 (10/07 09:07)
※ 编辑: miwy 来自: 140.112.130.159 (10/07 09:33)
1F：推 aceliang:你用CaCl2 precipitation transfection本来就会有颗粒阿 10/07 11:16
2F：→ aceliang:细胞还会看起来扁扁的咧。 10/07 11:17
3F：→ miwy:可是颗粒多到聚集成一堆一堆的应该就不正常了吧? 10/07 12:30
4F：推 aceliang:你混和reagent的时候有vortex或是bubbling嘛？ 10/07 19:39
5F：→ chaunen:不管有没有votex or bubbling, mix後直接加进去 10/08 01:28
6F：→ chaunen:噢 会错意了 歹势. 我用水溶DNA OK 10/08 01:31
7F：→ miwy:没有vo或bubble...之前都没这样做也都还ok 10/08 07:13
8F：→ miwy:只有这次才出现颗粒聚集的状况打算重抽一次midi了... 10/08 07:14