※ 引述《owl628 (owl628)》之铭言： : 大家好~最近要报告一篇paper : 但是之前没有接触过细胞跟动物实验(之前做酵母菌) : 因此有一些应该是很基本的地方有点不太清楚 : 也没什人可以问 : 我也有努力去查很多资料,但因为真的没碰过,所以还是不太清楚 : 拜托有人可以帮帮我,稍微解释一下 : 首先他选用HEK293细胞利用RNAi的方式降低A基因的表现 : 接着作者希望在老鼠上利用cre-loxP的方式KO A基因 : 但是所有的胚胎都死亡 : 之後发现在老鼠的肝脏可以专一性的KO A基因 : 接着作者又利用A基因KO的mouse embryonic fibroblasts(MEFs) : 它是利用表现CRE的病毒去感染MEFs达到剔除A基因的目的 : 首先我想问的是 : 1.为什麽要再利用MEFs去做HEK293已做过的实验,因为它是primary cell吗??? : 结果会比较可信???那为什麽不要一开始就用MEFs做,因为比较麻烦吗??? 建议您可以将paper附上 因为缺少实验目的，版上大部分的版友很难给您适合的答案 : 2.为什麽HEK293不用cre-loxP方式剔除,而MEFs为什麽不能用RNAi的方式??? 建议您先查一下Cre-loxP的原理，再想想HEK-293会有loxP的序列吗? MEFs的问题也建议先附上实验目的，以免对您造成误导 : 3.还有为什麽A基因剔除的老鼠胚胎会死亡,而经病毒感染的A基因KO的MEFs却可以活, : 是不是两者根本没啥关系,MEFs只是一种常用的primary cell而已??? 通常Conventional KO的老鼠 (全身每个细胞的A基因都遭到剔除) 出现胚胎死亡时 原因相当多种，因此，「胚胎死亡」与「MEFs死亡」不见得会有一定的关系！ : 4.最後都有肝脏KO的小鼠,为何还要用MEFs重复实验,老鼠的实验结果应该比 : 上面问题对於有经验的人可能都是很基本的问题, : 但是我真的不是很了解实验上一些选用的细节 : 麻烦知道的人帮帮我,跟我说一下,也请你多多包含我问了很多蠢问题 : 真的拜托知道的人救救我,非常感激~~~~~~~~~ -- 我不想在球场上当一个没用的人 也许我真得不是很厉害 再练下去也只有这样子... 可是.......我就是会认真地去练习 赌赌看明天会不会变强一点... --

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