大家好~最近要报告一篇paper 但是之前没有接触过细胞跟动物实验(之前做酵母菌) 因此有一些应该是很基本的地方有点不太清楚 也没什人可以问 我也有努力去查很多资料,但因为真的没碰过,所以还是不太清楚 拜托有人可以帮帮我,稍微解释一下 首先他选用HEK293细胞利用RNAi的方式降低A基因的表现 接着作者希望在老鼠上利用cre-loxP的方式KO A基因 但是所有的胚胎都死亡 之後发现在老鼠的肝脏可以专一性的KO A基因 接着作者又利用A基因KO的mouse embryonic fibroblasts(MEFs) 它是利用表现CRE的病毒去感染MEFs达到剔除A基因的目的 首先我想问的是 1.为什麽要再利用MEFs去做HEK293已做过的实验,因为它是primary cell吗??? 结果会比较可信???那为什麽不要一开始就用MEFs做,因为比较麻烦吗??? 2.为什麽HEK293不用cre-loxP方式剔除,而MEFs为什麽不能用RNAi的方式??? 3.还有为什麽A基因剔除的老鼠胚胎会死亡,而经病毒感染的A基因KO的MEFs却可以活, 是不是两者根本没啥关系,MEFs只是一种常用的primary cell而已??? 4.最後都有肝脏KO的小鼠,为何还要用MEFs重复实验,老鼠的实验结果应该比 MEFs的有可信度吧???还是就只是double check而已??? 上面问题对於有经验的人可能都是很基本的问题, 但是我真的不是很了解实验上一些选用的细节 麻烦知道的人帮帮我,跟我说一下,也请你多多包含我问了很多蠢问题 真的拜托知道的人救救我,非常感激~~~~~~~~~ --

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