作者weisont (陀飞轮)
看板Biotech
标题[求救] C2C12细胞培养的一些问题
时间Sat Aug 14 23:59:20 2010
我的实验使用的是C2C12小鼠肌纤维母细胞
实验的流程为
先以10%FBS DMEM培养继代myoblast
需要实验的时候以2% horse serum分化为myotube
在96well plate里面以2%HS养1*10^4个细胞
培养两天後加入含有100uM SNP(一种可以产生nitric oxide的药物)DMEM
每次实验进行到这边
加入100uM SNP
原本myotube会像网子一样爬满well的底部
但是一加入药物後
大概两三分钟~~放在显微镜下观察
就会发现边缘与管壁贴附的细胞开始慢慢脱离
然後就很像蜘蛛网有几条固定外围的线断掉一样
整片细胞会向内摺起来
曾经考虑过是不是浓度过高的问题
但是之前测试浓度的时候
是先将细胞与药物混和 再放入96well盘
这样就可以生长得很好
偏偏因为SNP会一直产生NO 导致浓度降低
所以想仿照PAPER上面写的12小时换一次药
但是只要一换药~细胞就会发生上述的情况
想请问版上各位前辈~~是否有过类似的经验~~
或是有甚麽建议我可以尝试的方法
先谢谢大家!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 220.132.216.42
1F：推 spirithorse:跳过太仔细的过程..分化的C2C12飘起来,可能是加药太大 08/15 02:26
2F：→ spirithorse:太大力,或是摇晃plate太大力,所以飘飘飘起来了~ 08/15 02:27