※ 引述《aggaci (台南工作的基隆人)》之铭言： : ※ 引述《sarahls (~sarah~)》之铭言： : : 我想请问纯化GST蛋白的resin大家会重复使用吗??? : 会重复使用 : 我们以前会用6M Guanidine-HCl去洗 : : 如果是不同的蛋白 : : 会不会重新配制呢?(因为怕污染这样!!??) : 不会，我作的时候从来没污染的情形 : : 虽然说有regeneration这个步骤 : : 那是不是就乾净了呢? : : 可以继续使用 : : 不同蛋白也没关系?? : 理论上是的 : : 因为有学长讲说怕污染 : : 所以一直重配@@ : : 那不就都不用regeneration : : 用过就换掉~这样是不是太浪费??? : 有点浪费 我就是觉得太浪费才会上来问问 学长就说怕会污染~可是我就觉得能重复用 却又很担心XD~直到网路查到有protocol说不同蛋白regeneration後可以再使用就放心多 了~再另外问一下 同一种蛋白重复用3次~之後他的结合能力会下降吗?? 因为我有看到用3次後要regeneration! : : 另外 : : 我再问一下~有人用pQE30作为表现蛋白的系统吗?? : : 因为我一直找不到好的诱导条件ˊˋ : : 网路上查的也一直在try~~ : : 也都没比较明显的band> < : 你怎麽看有没表现蛋白？只看soluble fraction吗？ : 还是看total cell extract? : western blot是否做过？ 我有做western blot阿~泡一抗 二抗後 压片没东西耶= = 我以前做过一次有band的~可是我最近再做又没有 而且我也换了不同的competent cell去表现 也没比较好阿> < 之前是BL21 後来还有SG13009(这有人听过吗?XD) M15这3种 印象中有的那一次是BL21的吧 --

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