作者boblu (六百)
看板Biotech
标题Re: [求救] Vector only 的 control 比 vector + i …
时间Tue Aug 10 03:45:04 2010
我想要用的那个 vector 序列上确定有酵素切位
但是没错 我现在就是在怀疑：
手上这管不是我抽的 midiprep 到底是不是标签上写的那个东西 以及品质如何
gel 上看起来大小是对 而且也很纯
可是我们 lab 本来就有好几支相关的衍生 vector
另外也不知道 buffer 里面有没有什麽怪东西... 酒精没去除乾净？
（酒精太多影响酵素作用 好像有道理）
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TA construce 双切以後看起来还满乾净的 就被切的 vector 以及我要的 fragment
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打算作的几件事：
1. double digest overnight 再试一次
2. 同时作 vector only with/without ligase 的 transform
至少可以确定是没切到还是只切一刀
3. 同时拿手上这管 pCS2+ 直接 transform, 重抽 midi,
顺便送 seqencing 看看 MCS 对不对
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◆ From: 131.212.202.90
1F：→ match308:你不分别做single digestion吗 只切一刀能解释为什麽V+I 08/10 07:25
2F：→ match308:长比较少,因为只有一边黏起来,另一边黏不起来,所以有 08/10 07:26
3F：→ match308:vector and insert ligation的反而没办法form colony 08/10 07:27
4F：→ match308:做2.如果vector已经去P了,就算只切一刀跟切两刀会差不多 08/10 07:33
5F：→ boblu:分别作 single digest 以後跑胶有作过 看起来都正常 08/10 09:40
6F：→ boblu:但是我现在想到我作 single digest 的时候, DNA 稀释较多倍 08/10 09:40
7F：→ boblu:可能因此减少了酒精什麽的杂质的干扰`? 08/10 09:41
8F：→ boblu:至於 single digest 以後的 transform... 应该是没有必要吧? 08/10 09:41
9F：→ match308:没甚麽必要,那就等2的结果吧 08/10 11:16
10F：→ match308:我觉得有没有酒精不是重点 08/10 11:17