作者nux7 (坎比)
看板Biotech
标题[求救] 大分子量的蛋白质转不过去! (350kDa)
时间Thu Jul 1 22:57:28 2010
最近刚尝试跑大分子量的蛋白质电泳,分子量为350kDa,在transfer部分遇到
大瓶颈, 麻烦板上的大家帮忙一下!!
我的条件是, 湿式转渍法, 固定电流300mA, 为时两小时, Transfer buffer:含Glycine&
Tris-base, 20%MeOH
(因为我跑分子量80kDa,条件为300mA/90分钟,就天真的选用这个条件 囧), 之後
把Gel用Coomassie染色後才发现,根本没过去...
爬了板上的文, 发现大家似乎有在加入SDS帮助转渍效率,想请问一下大家的方法与条件!!
另一方面, 在跑gel方面,我是跑6%的gel,条件为 固定电压130V/150分钟,因为marker
最大只到170kDa,所以都是凭感觉抓位置的,不知道板上的各位Running的条件也差不多吗?
还有就是Running完,buffer都烫烫的,这样可以吗?
谢谢大家了!!!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 120.126.97.10
1F：推 a001ou:MeOH会影响大分子量的蛋白转渍 建议可以不要加 07/02 17:07
2F：→ leoblack:减少你的MeOH(MeOH帮助fix),增加你的SDS(SDS帮助游离) 07/02 19:37
3F：→ leoblack:另外请整个抱去冷房里面跑~底部加着stir转转帮助对流散热 07/02 19:38
4F：推 a001ou:推楼上 07/02 20:30
5F：推 loham:400mA,2.5hr 250kDa可以,如果不想换buffer 试试看时间拉长 07/02 22:37
6F：推 loham:对了,是埋在冰里或加冰包transfer 07/02 22:39
7F：→ nux7:请问一下,MeOH2的减少与加入SDS的配方建议是? 谢谢!!^^ 07/03 03:26
8F：→ nux7:还有假如调整了buffer的配方,电压的参数是否也应该有所调整呢 07/03 03:27
9F：→ nux7:网上的资讯是加入0.05%的SDS,但似乎没有改变MeOH的比例,不知 07/03 03:39
10F：→ nux7:这样的条件是否得宜? 谢谢各位了!!! 07/03 03:41
11F：推 bigcat24:MeOH 10% SDS 0.05% 400mA 2.5hr try it :) 07/03 23:24