作者neuralandre (七彩喇叭手)
看板Biotech
标题Re: [求救] Cre-LoxP系统
时间Sat Jun 26 11:06:20 2010
※ 引述《tunafung (无)》之铭言：
: 我知道Cre-loxP的系统是怎麽作用
: 我想请问的是一般用这个系统的时候
: 是用什麽策略来交配小鼠
: 比如说我现在有个 vil-Cre/+ 的老鼠
: 跟ALDH2 Lp/Lp的老鼠配种後 接下来是要跟哪种基因型的小鼠在配
: 然後繁殖 感谢各位大大
这种是conditional KO 就是只有在特定组织或器官被剔除的KO mice
你现在有两只老鼠 一只是vil-Cre 另一只是ALDH2
这样配出来的老鼠就是表达vil的organ or tissue ALDH2会被KO
你的问题应该要这样问 你原始的ALDH2老鼠 是两条allele都有loxP site
还是只有一条?
如果是两条都有的 跟Cre老鼠配生的就是-/-(在特定组织) 一条的就是+/-
拿到老鼠就可以做实验啦
你原始的ALDH2 conditional KO mice
可能需要根据实验需求来做backcross breeding 这才是比较麻烦的地方
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 221.169.50.122
1F：推 pent:没做过有点好奇，back-cross麻烦是指？原本的老鼠难找？ 06/26 11:27
2F：推 tunafung:感谢neu大 我的ALDH老鼠是两条都是Lp/Lp 06/27 17:27
3F：→ tunafung:我想知道backcross breeding的一些细节 麻烦neu大了 06/27 17:27
对不起 我这边写错了一些地方
其实应该是这样
你拿 vil-Cre老鼠去配ALDH2 Lp/Lp老鼠 下一代拿到的一定是 ALDH2 +/-的老鼠
因为一条Allele一定来自於vil-cre老鼠 它没有loxP site 所以ALDH2还会在
另一条来自ALDH2-/-老鼠 才会被delete掉
所以你要再用+/-老鼠再配一次 才会拿到-/-的老鼠
这边是我昨天想的时候的失误 抱歉了
至於backcross breeding 跟genetic background有关
就是你拿到ALDH2 conditional KO老鼠的时候 是从chimera下来第几代
有些chimera是用129sv strain的ES cell打到B6 strain的embryo做出的
这时候有些journal会要求你要用backcross到B6 strain的老鼠第n代
实验做出的data才会被接受 (n=10 or其他)
当然你一开始用B6的ES cell打到B6的embryo就没有这个问题
或者你的老鼠拿到的时候已经backcross够多代了 那也没问题
不止journal要求 在国内外KO的讨论区内 有些PI发现 某些gene的KO
在pure的genetic background才有明显的phenotype
※ 编辑: neuralandre 来自: 221.169.50.122 (06/27 20:39)