作者linsnow (你还是省省吧)
看板Biotech
标题[求救] 想请问关於transfer大分子量protein
时间Sun Jun 20 01:01:43 2010
我所要侦测的是TrkA (约140 kDa)这个在细胞膜上的receptor磷酸化的程度
但发现无论在怎麽样都无法侦测到，连未磷酸化的TrkA也无法侦测
後来染胶的时後发现大分子量(>100 kDa)的部分似乎transfer的效果都不好
判断似乎是因为这样导致无法侦测到其protein的表现
在调整过各种条件仍无法解决
想请问是否有其他改善transfer效率的方法
或是有没有人也有做TrkA这个蛋白的表现，想请问是怎麽做出来的?
另外，我们家所使用的是invitrogen的XCell II Blot Module
但我也试过semi-dry的方式，依然无法解决
拜托大家了，谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.42.220.47
1F：推 mtdas:try 拉长transfer时间 buffer提高SDS/降低MeOH 06/20 01:43
2F：→ mtdas:membrane protein在lysis时 try提高Tx-100或做direct lysate 06/20 01:43
3F：推 tsubasawolfy:XCell如果你有照他配方正确配buffer 电压电流时间 06/20 06:48
4F：→ tsubasawolfy:都够 理论上连350kD的都可以过去XDD 06/20 06:49
5F：推 bluecsky:140KD感觉并不算很大阿 把时间拉长一点 还有你buffer是? 06/20 09:44
6F：→ bluecsky:个人操作的protein常常都是200kD+的 WB还没什麽大问题 06/20 09:44
7F：推 leoblack:大分子就别试semin-dry了,用wet效率会比较好 06/20 09:50
8F：推 icome:我是用湿式 Towbin's Transfer Buffer; 300mA; 3hr 06/20 16:26
9F：→ icome:180kDa左右都很清楚 06/20 16:27
10F：推 a001ou:140kD不算大 应该不是转渍不过去的问题而是其他的问题 06/20 18:52
11F：→ humwang:fibronectin >230KDa都没问题了，建议用湿式transfer 06/29 20:09