: 我直接回好了， : 这种蛋白表达本来就没有一定的对或错的方法 : 我看你的步骤也没问题 : 我把我的经验告诉你... : 你接上 plasmid 之後不知到有没有先定序，检查看看有没有 in frame : 若是有 in frame : 另外你是用 pet system，这里面有隐藏版暗黑 : 那就是经过 transformation 後，若你分盘养个两代或三代 : 也就是说你把tranformation成功的 colony 挑起来，划在新的盘子上，然後又挑出来 : 养再另一个盘子上 : 你的 plasmid 的 promotor sequence 会被重组 : 亦或是你把他存成 glycerol stock，挑出来後也会被重组 : 厂商的菌株资料没写 : 打电话问半天，他们才吱吱呜呜的承认会有这样的状况 但是 "very seldom" : 试试看把 plasmid transfrom into new BL21(DE3) 然後直接挑colony到 broth 根据最後的叙述 我也要提出附议 我曾经养过两三代 养个两三代以後就突变了 怎样都养不出我该会出来的蛋白 经过老板求证也是会有这个状况,老板是说"大概百万分之一的机率"这麽小 另外 我有一阵子用IPTG诱导失败率也很高(前一天配的也挂给你看) 後来我就索性全部改用乳糖了 每次都有表达呢~(乐奔) 然後就再也不用IPTG了 --

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