作者CCDMer (Best)
看板Biotech
标题[求救] 蛋白质诱导不出来!!!
时间Wed May 19 00:39:09 2010
各位板大好:
最近遇到了一个很头痛的问题~又急着又无奈所以只能来这求救
我使用pET101接上的我的目标基因~用BL21(DE3)进行诱导
我的方式是pET101/BL21隔夜培养後, 隔天再取1CC加入到新的LB medium
诱导到OD=0.5~0.6 ,加入IPTG(1mM)後, 37C培养3~6小时~跑SDS-PAGE
降温诱导,加入glucose这些条件,这个我都做过了,我的蛋白质约在14kDa
也不可能是包涵体的问题,因为我是连诱导都诱导不出来,试条件快两个月了
是因为分子量小所以诱导不出来吗? 换别株相同的pET101的clone也是无法诱导
,想说是不是pET101无法诱导小蛋白质~~我真的没有办法了~各位板大救救我好吗?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.40.162.176
1F：→ turtle24:序列正确吗 还是说产量太少所以看起来像没有 05/19 00:46
2F：→ CCDMer:序列正确!!产量真的看起来像没有!!因为诱导3~6H应该很明显 05/19 00:48
3F：→ biingru:请问你的plasmid放进 BL21(DE3) 是第几代？ 05/19 02:07
4F：→ biingru:还是你从transformation成功的plate划出来放进broth? 05/19 02:08
5F：推 biingru:还是说你有分盘 取一个colony画在别的盘子上 05/19 02:11
6F：→ statan:换E.coli吧，BL21(DE3)对於真核蛋白的表现很差。 05/19 14:27
7F：推 icome:codon usage的问题? 送human tRNA genes试试 05/19 14:40
8F：→ CCDMer:biig大~我从第一次transformation成功後挑起来broth了~没在 05/19 18:44
9F：→ CCDMer:继续继代~转进去BL21後就store起来了 05/19 18:45
10F：推 chiehgriffin:try rosetta 05/23 17:24