作者Locutus (电影狂)
看板Biotech
标题Re: [求救] 请问有人做过磷酸化的AMPK吗?
时间Fri May 14 12:54:12 2010
※ 引述《enolam (恋爱的感觉 回来ꐩ》之铭言：
: 我近来尝试着再做AMP-activated protein kinase (AMPK)
: 他是一个与能量代谢有关的蛋白质，需要被磷酸化後(pAMPK)才会具有活性
: 可是做了一个月pAMPK的band都非常的弱，不知道有没有哪位版友能提供一
: 下解决的方法，我的一些步骤条件大致如下:
: Transfer: semi-dry, 250 mA, 30 mins
: Blocking: 3% BSA, 2 hrs
: First Ab: 1:800, O/N (cell signalling, diluted in 3% BSA)
: Second Ab: anti-rabbit, 1/30000, 1 hr (cell signalling,
: diluted in 5% skim milk)
: 在摇完一抗和二抗後皆以含0.2% Tween-20的TBST清洗三次
: 结束上述过程後进暗房压片，无论压多久band都很弱ˊˋ，感觉band看得出来不细
: 但是就是很淡。
: 再麻烦各位先进给些建议了。
你用的应该是#2531这支吧，我的condtion是：
Transfer: wet, 400mA, 1hr
Blocking: 5% skim milk, 1hr
Primary: 1:1000 in 5% BSA, O/N
Secondary: anti-rabbit,1:10000 in 5% skim milk, 1hr (Jackson Immuno Research)
0.1% Tween-20 TBST wash
通常压5分钟讯号就蛮强的
我的sample有mouse brain和human cell line，用上面的做法都没问题
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◆ From: 140.112.125.206
※ 编辑: Locutus 来自: 140.112.125.206 (05/14 12:59)
※ 编辑: Locutus 来自: 140.112.125.206 (05/14 13:00)
1F：推 liuse:cell line不同会差很多 05/14 23:04