作者reiosea (reiosea)
看板Biotech
标题[求救] 关於protein refolding
时间Mon May 10 15:37:14 2010
板上各位大大好!
小弟最近要做关於inclusion body 的回溶以及refolding.
使用的是Thermo 的B-PER Bacterial Protein Extraction Reagent来做细菌的
蛋白质萃取，後以Inclusion Body Solubilization Reagent来回溶Insoluble protein。
後将已回溶的protein以针头注入半透膜做dialysis，以六小时一次做稀释的动作，先加
入6M Urea，後以25mM Tris-Hcl做稀释。但我发现到最後似乎沉淀物在半透膜上形成一
层膜状物将半透膜堵住了。
後将完全透析完的内容物做SDS-PAGE确认，发现没有东西。
整个透析在4度Ｃ下进行，在萃取部分有多加入lysozyme，Dnase及PMSF，Dialysis过程
有加入DTT。
所以我的问题如下：
第一.这个将半透膜堵住的现象是正常的吗？
第二.PROTOCOL中有一步要用27000g高速离心，由於我的sample很少，所以我无法用
超高速离心（该步骤为以Inclusion Body Solubilization Reagent回溶後离心），这
个步骤有差吗？我参考其他protocol并无此步骤。
请各位有经验的版大给予指教，感谢不尽。
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