※ 引述《kennezoe ()》之铭言： : 我们实验室会剪老鼠尾巴来萃取DNA : 方法是 : 1.尾巴剪碎，加入TNE buffer 300ul及proteinase K煮overnight : 2.加Phenol/Chloroform/Isoamyl Alcohol, 25:24:1 300ul mix後离心取上层，这步骤 : 做两次 : 3.加Chloroform/Isoamyl Alcohol 24:1 300ul mix 後离心取上层，这步骤做两次 : 4.加isopropanol(-20℃) 300ul invert : 5.加70%ethanol(-20℃)invert : 6.加100%ethanol(-20℃)invert : 7.DNA pellet 乾燥後以TE buffer回溶 : 通常在加入isopropanol之後，就会有白色丝状物出现，在离心後，会是白色的小pellet : 贴附在eppendorf底部。 : 然而有时加入isopropanol，也会有白色丝状物，但过一段时间或离心後，却沉淀出透明 : 的胶状物或是胶状物包裹白色pellet，这种胶状物比较大团又滑溜，有时可以回溶有时又 : 不行，取出来测的260/280 ratio也正常，可是用来PCR却常失败。 : 想请问大家，这种胶状物到底是什麽东西，如果不是DNA，又要如何避免萃取到它? 应该是 collagen 经过 proteinase K digest 55度 o/n 之後 先离心十分钟 然後用 p1000 去取上清 然後如果有吸到这团东西 我都直接把她像鼻涕一样拖出来丢掉 剩下的上清液 直接用 isopropanol 沉淀出来酒精 wash air dry 回溶之後就可以拿来 PCR 有用 chloroform 处理会比较乾净 我只有做 southern 的 genomic DNA 会这样处理 另外我取 proteinase K 的时候都会把 tip 头剪掉 不然吸起来的量跟应该有的量会差蛮多的 (我用 1:100) --

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