作者snowypuppy (啦啦啦....)
看板Biotech
标题Re: [求救] surface biotinylation 的 Quenching ꠠ…
时间Thu Apr 29 02:55:54 2010
※ 引述《iamrim (笨小孩~)》之铭言：
: 用biotin去label surface protein (ex:E-cadherin)
: 证明E-cadherin internalization
: 在Quenching buffer(reduced glutathione,0.83M NaOH..)treatment
: 去除在surface上bibotin
: 但treat Quenching buffer之後,细胞就开始有点飘飘
: 有点黏稠的透明液(该不会是细胞都破了.DNA流出来?!)
: 加了PBS之後细胞全都飘了...(Quenching buffer还蛮硷的)~
: 不加PBS直接lysis.protein都不知道有没有收好>"<
: 不知道该怎麽办才好....
: 希望有经验的可以指导...谢谢
做biotinylation assay使用的6-well plate我会先coating 0.2mg/ml的PDL
细胞比较不会有飘散的问题
不然收lysate前有好多要wash的步骤 细胞真的很容易飘走
建议你可以试试看 :)
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