提供我们lab的做法 首先我们用紫头管采血 接着缓和的将全血mix一下後 再用同体积的 RPMI mix 此时 blood:ficoll=2:1 我们先将ficoll分装至15ml离心管中,每管约4 ml 再用很缓慢的速度将 8 ml mix过的全血滴入含有ficoll的离心管(此离心管呈45度斜置) 之後离心分层的程序跟你的差不多 不过我门一路都是用RPMI来做 wash 及 稀释 wash时..我们是用10 ml的RPMI来做wash动作 让你参考看看.. ps.1.我们total约 25cc 的 blood 与 同体积的RPMI mix 2.六管离出的雾状层集合在同一管在开始做wash的动作 後面就都跟上述说的一样 希望对你有所帮助 ※ 引述《kappaher (恶灵退散)》之铭言： : 我是用Ficoll-paque分离lymphocyte : 只是分离的全血量很大(一次分离120ml) : 取全血时有注意采血管内的血液没有凝结的血块 : 全血会先用添加heparin的PBS做稀释 : 然後进行分层~ : 而後取出雾状层以3倍体积的PBS/heparin清洗1次 : 离心後去上清液 : 之後用RPMI清洗pellet2次 : 而团块就在换至RPMI清洗的状态下产生的 : 团块的样子是黄色 有点像是脂肪组织的感觉 大小最大约0.5公分 : 用pipetteman冲散 会变小块，但没办法完全打散 : 在显微镜下观察 结块的东西并不是细胞 : 样子有点像没有菌丝的霉菌 : 而细胞会被它包住 或者细胞会围在团块的外面~ : 有点困扰.. 因为数量还满多 (怕会影响细胞计数、浓度) : 不晓得有什麽方法可以改善? : 不知道有做过PBMC分离的各位 是否也有遇到这样的状况 : 或是怎麽解决掉团块出现的问题?? : 或是有可能是什麽问题所产生的? --

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