作者levi1802 (wilson)
看板Biotech
标题[求救] 关於使用tn9 transposon 产生突变菌株的验证
时间Wed Apr 21 20:24:13 2010
小弟是念生物资讯的硕二的学生，
最近因为要提学位考，
老板突然要我用实验验证我的分析结果，
於是......以下省略
我在paper中看到作者使用Tn9 对E.coli的特定基因 dam 进行lost function的突变
由於研究的关系，我们拿到这只E. coli K12 tn9::dam mutant的细菌
只是要用PCR的方式去check他的dam有确实有被mutant，
我知道dam 基因的序列，但是我不知道他tn9插入的位置，
也不知道tn9的使用序列，或是长短
所以我不知道该如何设计primer去把他夹出来
这样就无法跟wild type比较dam基因的序列差异
小弟生边的人大都只会写程式，没有人可以询问
请各位大大帮帮忙，非常感谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 120.126.36.171
1F：推 ROKEE:那就拿dam的DNA序列去做southern阿..... 04/21 20:30
2F：→ levi1802:因为我们所上的实验是只能做电泳，所以我也只能做做PCR去 04/21 20:35
3F：→ levi1802:夹夹看，藉由大小来比较差异，可是我不知道该怎麽执行， 04/21 20:36
4F：→ levi1802:很抱歉，问这麽不专业的问题，可是我只是个写程式的研究 04/21 20:37
5F：→ levi1802:生，老板突然要我验证，整个就是想要我死，我只有抽过DNA 04/21 20:38
6F：→ f9361046:我想去P这个基因的全长 然後去定序 在上网和WT比对 就知 04/21 21:44
7F：→ f9361046:到插在哪里 和序列了 04/21 21:44
8F：推 Ianthegood:如果只是要check就把dam分段批 电泳比对WT就可以了吧 04/22 02:16
9F：→ levi1802:谢谢各位，我多设计几段primer，去check看看 04/22 11:12