作者Lambe (落日残红始觉春空)
看板Biotech
标题[求救] 关於分polysome fraction的实验
时间Wed Apr 14 19:55:20 2010
小弟我又来问问题了orz
先谢谢之前不吝给予指教的前辈们<(_._)>
目前在做sucrose gradient试图看目标RNA，在不同的药物刺激下，做出蛋白质的速率
是否有差异。(已经确定目标RNA的量在不同刺激下并没有改变，但是蛋白质会有很明显
的变化)。
我的问题是： 找来的protocol上面写到，超高速离心完後，要用一台机器做
fractionation。但这台机器还在船上.... 大概还要好一阵子才会送来。
我猜那台机器的原理应该只是测OD看total RNA而已(OD254)，所以想用手动的方式测。
(如果这部分有错还请各为前辈指正)。
目前sample已经手动分成约15个fraction，但是我不知道要怎样测OD比较好。
我有想到两个方法：
一个方法是拿分出来的fraction用实验室的光度计直接测(未纯化)，但是那台要用cuvet
，需要约1000mL的体积。可以每个fraction拿10uL+纯水990uL下去测吗?
还是说必须要先用TRIzol纯化出total RNA再测?
另一个方法是去所上借nano-drop测(也未纯化RNA)
另外Sucrose会不会影响测OD的结果呢?
麻烦大家了..
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1F：→ Lambe:因为每个fraction的sucrose浓度都不一样 会影响OD吗@@ 04/14 20:01