作者orangesun (桔)
看板Biotech
标题[方法] ATP solution
时间Sat Apr 10 00:52:07 2010
各位板友好
最近需要配制ATP solution for cell culture stimulation
查过sigma catalog有找到ATP anhydride powder & cell culture tested
solubility in water = 50mg/mL 换算成molar concentration约100mM
google找过方法 也想过要不要买现成的ATP solution(大多是分生用途)
因为本身实验用量较大(每组实验至少需50 nMole 如果买分生用的1 ml/vial用太凶)
有查到资料说ATP在非生理pH值(6.8~7.4)不稳定 所以solution要调pH
而且是细胞用 理应配在PBS里? 过0.22 um filter会不会被吸光光?
不知道有没有板友能够建议较好的方式可以prepare solution? 彼此讨教一下:)
ps.是要测试inflammasome相关的实验 paper的ATP working conc. 5mM
我目前初步的想法是 配在LPS-free distilled water
因为一般配PBS的二次水有太多endotoxin 可能造成不必要之background
1g ATP powder in 20ml water = 100mM stock
假设过0.22um-filter没有问题的话 调好pH再过滤 分成vial冻-20度
实验时以20x dilution 每1ml culture就要加50ul aqueous solution 会不会太多?
怎麽想好像都怪怪的 目前手边也没有ref可以参考 不知道大家有没有类似经验呢?
谢谢回答的夥伴:)
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