发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出 以方便板友帮您追踪问题 ----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章---- 大家好 我想请教各问高手有关Chromatin IP的问题... 我现在正在做ChIP 我在我的目标蛋白质N端接上一个MYC TAG,只有一个， 而我的蛋白质接上MYC TAG之後的大小为 53 KD，我的目标蛋白质也会跟另外一个蛋白质 interaction，这个蛋白质大小为130 KD，我现在的目标，是要先看看我的菌株(yeast) 在经过formaldehyde之後，anti-myc抗体是否能够抓到我的目标蛋白质（53KD）， 我的步骤如下: 1. 养菌50ml O/N 2. 加入37% formaldehyde 1.4 ml 反应20 min 3. 加入2.5M Glycin 2.5 ml (final con= 125nm) 4. 收菌，以 cold PBS wash 两次 5. 加入break buffer1.5ml，以及beads，破菌 6. 离心，以1500xg 5min，4 度C 离心，吸取上清液 7. 上清液约1ml，分成两管，每管0.5ml 8. 做sonication，之後以10000xg 10min，吸取上清液 9. 其中一管，加入anti-myc (monoclon)4度C反应O/N，另外一管当作Input 10. 隔天，有做IP那管加入Protein G beads，反应2 hr 11. 将IP那管以及Input sample去跑WESTERN，看目标蛋白质有没有被抓到 可是我做完之後，发现我的蛋白质有时候有出现，有时候没出现，要不然就是讯号很弱， 我用的anti-myc 是 Cell signaling牌子的，使用IP浓度为1:500，总之就是没有很 理想的结果就是，不知道板上高手有没有人做ChIP的时候也发生过同样的问题，抓不到 蛋白质，对了，Input sample部份可以抓的到蛋白质，只有IP的sample抓不到。 我在想可能的原因，会不会是跟我目标蛋白质interaction的蛋白质比较大，所以在 formaldehyde的时候，挡住了我的epitope，希望各位高手能给小弟一些意见，谢谢。 --

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