作者content71 (罗莉饲养中...)
看板Biotech
标题[求救] 关於trypsin作用这样对吗？
时间Tue Mar 30 15:29:57 2010
我大概了解trypsin在继代时的用途，
但是最近有位老师，
要我们把trypsin (不含EDTA) 0.05% 加入细胞 in HBSS
观察30 min ~ 2hr
然後他认为这样可以 block 细胞表面的蛋白质 (这是目的)
但是不会破坏细胞间的 tight junction
也不会剥离细胞
我们使用的是内皮细胞株 Caco2 ，
这种细胞在培养三周後会形成完整的tight junction
请问各位这样的想法合理吗？
因为不含 EDTA，tight junction 不会打开，所以不会影响细胞贴附和紧密性，
但 trypsin 仍然可以影响细胞表面蛋白
但是我认为
1. 在 HBSS 内，trypsin 应该就失去作用了
2. 即使有作用，在长时间处理下 (30min~ 2hr)
trypsin 除了分解细胞表面蛋白，也应该会分解 cadherin
造成 tight junction打开
(甚至使细胞脱离表面)
此外，我们得到的结果，似乎是会打开 tight junction
(但学妹觉得有可能是她实验技术不纯熟所致)
难道要调整 trypsin 浓度吗
但是我觉得这样的想法不太合理，想听听大家的意见，谢谢！
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◆ From: 140.114.46.119
1F：→ saviora:细胞和细胞间的tight junction没有打开 你怎麽计数细胞 03/30 17:25
2F：→ saviora:说太快了 这个要先查资料才行 03/30 17:27
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