作者icome (木村阿宅)
看板Biotech
标题[求救] 请问有人用过中研院lentivirus expression系统吗?
时间Sat Mar 20 19:08:08 2010
我目前用中研院给的pLKO AS2.neo做virus
外源基因有成功接入
用LNCaP当作被感染的细胞
经感染後用G418处理约三天 没有看到细胞有死亡的现象
且细胞型态有所改变 和使用shRNA病毒感染的状况一样
(变得较细长 因为对照组也有同样状态故应是一般状况)
但是跑Western却看不到所要表现的蛋白!!
一开始认为是cloning出问题 可能是frame shift
但是四组实验组(独立的construct)都同样状况 我当初用Pfu 效果应该不会这麽糟!
总之我会拿去定序 如果真的是四组都frame shift那也真是太赛了.. = =
我想请问的是 如果不是construct出错 可能是哪里有问题呢?
目前是猜测titer太低...但如果是MOI太低 在G418 selection时应该很多细胞死掉才对?
怎麽样都想不透啊.......有人用这套系统成功表现过吗? 感谢回答!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.62.135.23
※ 编辑: icome 来自: 61.62.135.23 (03/20 19:10)
1F：推 ranilla:我觉得G418来筛的时候，细胞死很慢可能是原因之一 03/20 19:37
2F：→ ranilla:RNAi core的，我是用puromycin的vector，两天该死的就死了 03/20 19:38
3F：→ ranilla:其他非用RNAi core的vectore，但用G418来挑stable clone 03/20 19:39
4F：→ ranilla:如HEK，CHO cell，我是把serum减为5%，这样死比较快 03/20 19:41
5F：推 liuse:G418 放一个星期 就会死了 别紧张 03/20 20:24
6F：→ icome:八天後细胞开始死了...看来的确是titer问题! THX 03/25 12:35