虽然我之前抽的都是动物的gDNA... 但我怎麽觉得你的步骤怪怪的?? 你的过程怎麽会做两次沈降？（步骤6、12） 照我所知的原理跟抽动物的经验 应该把步骤10. protease K跟3. extration buffer并在一起处理 煮65度 for 3hr （目的是破细胞跟切掉proteins） 之後做一到两次phenol/choroform extraction （萃取并分离DNA跟其他物质） 再用100% EtOH + sodium acetate沈降 -20度 overnight或RT 30 min （温度越低越久） 离心、75% EtOH清洗一次、烘乾就可用ddH2O或TE buffer回溶了 之前抽过一次植物的 似乎也没分两次沈降 虽然我没做过抽蕈类...= =a 如果要参考其他protocol来做 我觉得参考plant的可能比较合适 不然看有没有其他抽过蕈类的人分享作法搂~!! 以上一些建议 ※ 引述《ko363630 (打杂路人甲)》之铭言： : 老板最近要我抽牛樟芝的gDNA : 我从自家的分生圣经以及学姐之前的做法下去做 : 虽然有很成功的抽出来 : 但是浓度却是相当低，老板说，可能是抽的时候DNA被切碎太多 : 但是我自己觉得不太可能，可能是牛樟芝用的量太少(取1g抽) : 这是我们的实验步骤 : 1.滤纸抽气过滤(无菌水清洗) : 2.液态氮研磨 : 3.每克菌丝加入4ml extration buffer : 4.add 4ml phenol/chloroform : 5.centrifuge(4oC、10000rpm、10min) : 6.add 1/10 3M Sodium acetate(pH5.2) and 100%EtoH to supernatant at -20oC for : 2hr : 7.centrifuge(10000rpm、10min) desupernatants in RT : 8.add 20mM Tris-HCL(pH:8.0) : 9.add 1ug RNase in 37oC 30min 150rpm : 10.add protease K (final concentration 150mg/ml) at 37oC for 60min : 11.add phenol volume mix, centrifuge(4oC 12000rpm 10min) : 12.add 1/10 3M Sodium acetate 3x voulme 100% EtoH (Final concentration 70%) : at -20oC 30min : 13.centrifuge(4oC 14000rpm 25min) : 14.add 10mM Tris-HCL(pH:8.0) : 这是我的实验流程(第一次尝试英文请不要care>"< 我才大二，英文还不好) : 老板说，这次抽出来的片段碎掉很多。之前曾想过改用lysis buffer 来破菌。 : 自己上网找qaigen、promega 的protocol但是找到大部分都是关於blood、trusses、 : plant、yeast(同样都是fungi，但是不知道能不能用) : 想请各位板上的大大不知道能不能提供一些经验 : (要买kit的先不要好了= = 老板听到要花钱不知道会不会杀了我>"<) --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.94.205