作者tsubasawolfy (悠久の翼)
看板Biotech
标题Re: [求救] western的胶跑起来会分层
时间Tue Feb 23 12:18:47 2010
※ 引述《mg880613 (Mag)》之铭言:
: 这几天跑起来的胶一直会有分层的状况,
: 胶凝时和预跑前都有检查过,
: 都是完整的下胶不会分层,
: 但是开始跑sample後没多久,
: 就会在sample底部和下面5 mm左右的距离形成分层,
: 蛋白就卡住跑不下去了......
: 本来怀疑是APS的问题,不过新配以後还是一样,
: tris buffer ph也定过了没问题,
: 请问还有可能是哪边出错呢?
过年前看到这篇 过完年後回来就遇上同样的问题Orz
基本上出现的问题都跟你一样
sample卡住 连Marker也卡住 (第一批sample就跑了不寻常的3小时 第二批就卡了)
stacking会跑 但是很慢 遇到 resolving gel就会停住不动
跑第二批时有注意到电流只剩下10mA (正常是80mA) 理所当然就怀疑胶做坏了
然後经过两天trouble shooting解决...
第一天 1.新SDS-running buffer stock->DEAD
2.新Tris ph8.8, 6.8->DEAD
3.新acryamide->DEAD 10%SDS->DEAD
4.新APS TEMED->DEAD
第二天 1.换电源供应器->DEAD
2.换电线->DEAD
3.换上盖(怀疑接触不良)->DEAD
4.爆气放大绝 换新一组电泳槽->妈妈 它活了!
後来旧电泳槽拿起来看跟上盖接触地方完整 铂丝也完整没断 不过有焦味出现
只好说它老了该退休了一.一
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.174.118
1F:推 chvkimo:大推 试这要花好多时间 谢谢分享 02/24 00:27
2F:推 littlelizard:勇者!!! 02/25 10:01