作者lenti (啄木鸟)
看板Biotech
标题Re: [求救] 切片破洞很久了!!!请帮帮我
时间Mon Feb 8 13:31:06 2010
※ 引述《pei24 (黑哥)》之铭言：
: ※ 引述《pei24 (黑哥)》之铭言：
: To 前辈们...
: 我把我切片染色的照片 po 在 http://www.wretch.cc/album/peipink
: 麻烦前辈们给予指教.....
: 我实验室的perfusion protocol为以下
: saline 50 ml(流速约为 6 ml/min)
: 4% PFA 100-200 ml(流速约为 4 ml/min)
: 10% sucrose 50ml (流速约为 4 ml/min)
: 取出 spinal cord 之後会把 L4-L6 切断
: 泡20% sucrose 待下沉後改泡 30% sucrose 约3天
: 用O.C.T包埋,放在-20度等O.C.T变白後再放在-80
: 至於切片时我的刀片每换一个组织我就换新的刀片
: 在切片的过程中也会不断的换刀片的位置...
: 请给予指教!!
以前我待过的lab是做SMN的, 常要切spinal cord, 你的问题我遇过,
出现很多破洞.
切spinal cord, 做perfusion还是比不做perfusion切的效果更好，
虽然这个流程很花时间。
会出现破洞的原因是出在perfusion时的灌流速度过快所致，
由於灌流速过快, 造作微血管爆破, 而造成了切片上的空洞。
perfusion时将流速减慢, 你就可以得到很完美的片子了。
其实你已经切的不错了。
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.125.66
1F：→ vandia:推~ 经验很重要,这我想破头也想不出是这个原因... 02/08 22:48