作者anchi (我家有只可爱小都)
看板Biotech
标题[求救] 关於GFP transfection
时间Wed Feb 3 20:58:36 2010
最近做了transfection,
用lipofectamine transfect 一个带有GFP的plasmid,
transfect完隔两天,萤光显微镜下看到有发绿色萤光的细胞约50%,
之後我就继续用加了G418的medium筛, (plasmid上有neomycine resistance gene)
细胞持续养了两个礼拜, 可是这段期间有绿色萤光的亮点却越来越少,
今天看大约只剩10~20%了.
细胞的型态都正常,存活数量也持续增多,
抗生素的浓度我是参考过许多相关paper的浓度.
到底是甚麽原因呢?
以下是我的想法,若有观念错误请大家指证:
我的plasmid上是用CMV promoter,
照理说,GFP gene在真核细胞内应该会持续被活化表现,
细胞内应该一直会有GFP protein.
所以若细胞有这个plasmid, 应该会持续散发绿色萤光.
那麽在抗生素筛选下,细胞数量也有增多,为何发萤光的细胞数量越来越少呢?
请大家指点我是否有观念错误,
谢谢! :)
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◆ From: 125.231.214.205
1F：推 liuse:正常 stable cell line表现量本来就不会那麽强 02/03 21:30
2F：→ liuse:等它长好 在观察看看 02/03 21:30