作者sugar01 (简单的天空)
看板Biotech
标题[求救] 抽取核蛋白的问题 HEK293T SK-N-SH
时间Tue Jan 26 16:20:45 2010
各位朋友好 我第一次在这里发文
最近在抽核蛋白的实验 细胞株分别有HEK293 SK-N-SH 这两种
抽完跑western的结果 抽不乾净! 用actin来抗我抽完的核蛋白和质蛋白,看不出差异
我用的方法是细胞收下来後---> PBS wash*2 ---> hypotonic lysis buffer(1:10)--->
不vortex 放冰上30分钟 ---> 离心留下pellet(细胞核蛋白) 上清液留下(细胞质蛋白)
---> 用high salt buffer ---> 放冰上30分中钟 (每5分钟vortex一下)--->离心
取上清液(核蛋白)
这是我的实验流程,後来hypotonic 那一步骤做了两次,核蛋白仍然抽不乾净
不知道板上有没有 抽过这两种细胞株 核蛋白的朋友
可分享您使用的方法呢 我也不清楚我的问题出在哪
谢谢了!!
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◆ From: 140.122.152.84
1F：推 nerdz:光是泡着hypo放冰上够力吗?可以考虑研磨或是针筒 01/27 16:41
2F：推 smilejojo:加入hight salt buffer後sonication，在离心取上清液 01/27 18:24
3F：→ ssds:推一楼，用玻璃棒搅几下感觉才够力 01/28 19:25