作者Asialin ( )
看板Biotech
标题Re: [求救] 抽取 genomic DNA 用kit还是用液态氮比 …
时间Tue Jan 26 13:00:42 2010
※ 引述《conan11 (民国的福尔摩斯)》之铭言：
: 最近用Promega的kit抽genomic DNA 觉得效果真的不太好
: 照protocal里的处理只用了11mg的tissue sample
: 但是抽出来只有1~2ug的DNA
: 想请教各位是我有什地方遗漏了吗？(Proteinase K也加了)
: 还是最好的办法还是得用液态氮好好的研磨一下？
: 先谢谢各位的回覆
用液态氮磨碎是可以让lysis时间缩短
但只要有充分lyse，不用液态氮也无所谓
我用QIAgen的kit，加tissue lysis buffer前用刀子剁碎
然後56度加热，每十分钟vortex十五秒
直到组织完全溶化变成均质溶液才进行下一步 (这很重要)
。。。。。。。。。。
QIAgen的说明书写lysis time大约一到三小时，甚至O/N
实际操作大约是一小时左右
从你的文章叙述感觉似乎是lysis没有做好
另外sample的量，不知是否你用的kit建议就是11mg
因为我没用过P牌kit，Q牌建议是25mg，脾脏或淋巴结等细胞密度较高的组织则是10mg
你可以试试看用多一点组织
但不要超过说明书建议的范围
不然lysis也会做得不好
个人经验参考看看罗
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.40.27
1F：推 conan11:谢谢你 很棒的建议 我先用液态氮试试看 01/26 22:19
2F：→ conan11:还想请问一下 vortex的强度大概多少？ 01/29 19:06
3F：→ Asialin:最大强度 02/01 17:03