作者abbyyam (ㄟ逼)
看板Biotech
标题[求救] 组织萃取蛋白及western
时间Fri Jan 22 14:49:04 2010
最近在下的学妹在做研磨动物肾脏抽取蛋白及western
所用的方法是加 Thermo的T-PER下去研磨并萃取组织中的蛋白
western 的步骤是没有太大问题，transfer 的条件无论是90V
1.5hr 或是25V O/N 都有试过，但是问题来了
她做出来中间的band 会比较淡或是不见
左右两条(除了marker外的第一个和最後一个)会比较正常
在定量方面应该是OK的，跑胶的过程也看似正常
一、二抗的浓度或是摇摆方式也都跟我的一样
所以我目前怀疑的是transfer 的时候是不是因为用来萃蛋白的buffer不同
(我是用RIPA)或是其他甚麽原因造成transfer 不完全呢?
因为他transfer 的时候我不在场，所以也不知到哪边出了问题
请问大家有这样的经验或是知道该如何解决吗? 感谢
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