作者blueashin (tRoMboNe pLaYer)
看板Biotech
标题[求救] AT-rich PCR 无产物
时间Tue Jan 19 18:45:55 2010
想请问各位高手
我要扩增一段DNA片段
前提是这组primer用於扩增该基因的cDNA是没有问题的
但是不知道为什麽 用来扩增DNA的时候 却怎麽放都放不出来
於是我分段来扩增这个基因
没想到分成两段来扩增 居然可以扩增出来
问题来了 我试图把两段用RE切断然後接在一起
再进行全长DNA扩增
没想到 依然失败
後来把两段分别定序 确定是该基因没错
也发现它的AT content大概是70%
google了一下发现大家都用降低extesion温度 以及拉长extension时间来扩增这样的片段
於是我做了extesion temperature的gradient pcr
发现在extesion temperature=56时 有我要的产物
但我想再重复
却又不见了
QQ
实在很苦恼 不知道有没有人遇过这样的事情
感恩~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 210.241.123.131
1F：→ puec2:Google: Betaine DMSO 01/19 21:49
2F：→ blueashin:恩...我想 这两样是高GC比的时後在用的吧? 01/19 22:08
3F：推 singren:条件多试一下吧~总有做出来的时候XD" 01/20 12:16
4F：→ blueashin:~.~"谢谢你的鼓励~ 01/20 23:13
5F：→ bobbygau:最近也是在做一段AT-rich基因的扩增，一直P不出来，直到 01/21 23:59
6F：→ bobbygau:试了瑞林生技代理的KAPA HIFI，超赞，他们有试用品。 01/22 00:02
7F：→ blueashin:喔喔 请问 南部有代理商吗? 01/23 00:40
8F：→ blueashin:我目前用的是clontech advantage2已经是很敏感的酵素了 01/23 00:42
9F：→ blueashin:不过当然有时候过於敏感的酵素会有反效果 01/23 00:42
10F：→ blueashin:谢谢你提供的资讯 我会试试看^^ 01/23 00:42