回文补充一下~ 因为开头觉得您目前使用的PCR的 primer及条件似乎目前没办法调整到最好 所以感觉这方法作plasmid 确认可能会有些隐性的问题存在 (PCR : P不出来不代表基因确定不存在，可能是没找到最佳化条件) 所以同时面对万恶的PCR 及万恶的 clone 方式时 先拿抽出的plasmid跟空的vector(未切)，两者分别用EcoRI 作digestion， 然後取一些跑胶 若切出来大小比 空vector大1Kb : 恭喜你! clone基因可能有送入，是PCR的问题! 若切出来是空的，基因确实没送入载体 : 恭喜你!只要暂且先专心面对clone的问题! PCR就先丢一边吧! 当然之後若确定确实是clone上的问题的话 可能继续往上推，在ligation的时候做一个vector only的控制 看看 E. coli 在transformation 只有vector 的生长情况如何 另外上面有许多大家的建议都非常不错，我也在这找到很多好方法~~ 你可以参考并和实验室或同学讨论使用~~ 祝顺利!! --

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