作者Xalocinth (sunshine after rain~~)
看板Biotech
标题[求救] 请问WB 一抗或blocking可以放两个o/n吗?
时间Wed Jan 6 19:04:57 2010
要作western blot
因为一些关系 仪器上可能礼拜一才能压片显影
但我礼拜五就想要跑胶transfer了
这样的话 可以4度C blocking 两个晚上 或是一抗放两个晚上吗?
我们一抗都有加NaN3当防腐剂
或甚至是 礼拜六日作到二抗加完反应完 然後membrane放在PBST中保存到礼拜一?
不知道有没有人这麽做过? ^^"
谢谢~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.66.100
1F：推 lail:transfer完就把membrane以塑胶膜包住用封口机封好，冰-20冰箱 01/06 19:33
2F：→ lail:等确定机器好了再进行之後的步骤 01/06 19:33
3F：推 leoblack:只要你确定不会长菌~放2个o/n没关系啦~ 01/06 20:50
4F：→ nerdz:blocking这样放是没问题的 01/06 21:04
5F：推 celestial318:理论上是OK的 01/06 22:28
6F：→ FUSION87:blocking太久要注意奶粉沉淀的问题，我通常是一抗放两个 01/07 03:09
7F：→ FUSION87:晚上，二抗放太久会很脏(依二抗种类不同有差) 01/07 03:10
8F：→ FUSION87:也试过Membrane泡buffer(TBS or PBS)放4度是OK的 01/07 03:12
9F：推 chrissim:牛奶沈淀就挫赛了.我曾经有惨痛经验 Orz 01/07 03:14
10F：→ FUSION87:PVDF的话记得手册上应该有写可以放乾用要前再用MeOH激活 01/07 03:16
11F：推 chvkimo:transfer上protein後再放乾 之後还还能用MeOH激活 ? 01/07 10:44
12F：→ cyin592:1抗放4度c两天是ok的 但PBST泡太久讯号会变弱 不建议 01/07 11:26
13F：→ Xalocinth:嗯嗯 知道了 决定一抗4度C摇两o/n 感谢大家!! 01/07 20:47
14F：推 tincta:1抗o/n(我用过3天)可以 但是blocking不建议 PBST尤其不建议 01/08 01:00