作者singren (Almond)
看板Biotech
标题Re: [求救] 目标蛋白无法以Pichia异源表现
时间Tue Jan 5 12:21:32 2010
※ 引述《littlelizard (专注)》之铭言：
: 大家好
: 最近在做异源表现的实验
: 使用的是 Pichia 表现系统
: 表现的是我们实验室发现的免疫调节蛋白 分子量约 13 kD
: 之前的学姊用 Pichia pastoris KM71 表现的时候就遇到无法表现的问题
: 目前我试过 Pichia angusta (Hansenula polymorpha) 和 P.pastoris KM71H
: 两种 host 也都无法顺利表现 = =
: 因为类似的蛋白做过很多 也都可以成功表现
: 所以我想应该不是诱导不成功的问题 (我用1% MeOH 诱导)
: 目前推测可能是 codon usage 的问题
: 但我比对了一下 并没有连续低於10%的 codon
: 甚至其实都是很高 %
: 实在是不知道还有什麽原因造成无法表现 = =
: 只好来请问各位前辈有没有类似的经验?
: 以及可能的原因?
: 谢谢
我学长也是做异源表现的
他最近怀疑是不是因为有些DNA(exocytosis sequence) or protein後修饰的序列
在Pichia里面不能被切掉
毕竟是不同物种
所以可以把这些序列切完後送进去看看
上礼拜跟学长听的XD"
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.55.232
1F：推 littlelizard:抱歉听不太懂 = = 话说我的蛋白没有转译後修饰的问题 01/05 20:34
2F：→ littlelizard:做过预测没有醣基化和磷酸化位点 01/05 20:37
3F：→ littlelizard:可以说详细一点吗? 谢谢 01/05 20:37