板上各位先进好 因为刚进入实验室做专题,指导教授要我先建立一个 EMCV working bank 但是因为实验室学长姐都毕业了 虽然找了很多资料,依然有些地方不懂,想请教大家 1.病毒株是由国外购买回来,预计用 Hela 放大 请问一开始我要加入多少病毒到多少细胞内 ? 因为我上ATCC 有看到其他株病毒放大的的建议用量(0.1 MOI), 但这株细胞没有,所以请问有建议用量吗 ? 2.ATCC上面写 incubation time 是 4 days, 请问我是四天後收上清夜就冷冻起来吗 (-80 ? ) ? 需要加抗冻剂吗 ? 需要在冷冻前以 0.22 filter 去除细胞碎片吗 ? 3.预计实验的操作流程如下 a.从 flask 上取所需细胞数目 (约 1ml) 加入病毒感染, 室温反应 30 min 後 再将细胞贴回 flask　内, 加入约 9 ml fresh medium, 於 incubator 内感染 4 天 (protocol上写 可以 90 rpm 轻微扰动, 请问需要吗 ) b. 以显微镜确认有 80%　CPE 後, 取上清液过 0.22 filter 直接冻到 -80 内 不知道上述步骤有没有需要改进的地方 另外不知道有没有关於病毒操作步骤相关可参考的网站 有上去 Springer Protocol 看过, 但好像都没有这些比较基础的 protocol 可参考 以上, 先谢谢大家 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 218.167.203.226