作者chl20020933 (chl20020933)
看板Biotech
标题Re: [求救] 转殖菌放大培养
时间Sun Dec 6 01:58:54 2009
※ 引述《ilovesea (结束了!:D样)》之铭言：
: 各位版友好
: 先谢谢先前的回答 让我受益良多
: 想要继续请教：
: 我目前的状况是
: 我拿了先前做的菌保
: 先养在含抗生素的plate上
: 他一样有长
: 因为他有长 所以我认为它质体存在
: 再转接到10mL含抗生素的broth中
: 摇瓶16小时後 OD600约1.3左右
: 先取出简单破菌 测酵素活性
: 但结果似乎是没有活性
: 但他再含抗生素的环境一样生长
: 请问为什麽会这样呢?@@
: 谢谢大家
刚好有空 回你一下吧
你的实验很多东西没有确定
标准步骤请完成 再来讨论酵素活性问题
第一 plasmid在不在 对不对
要破菌前还是抽一下plasmid RE酵素切一下 看pattern就可以知道
第二 蛋白质真的有纯化到？
最简单的 western blot 有结果吗？
pET series有很多fusion的target 可以做确认
如果蛋白质都没表现 还需要谈活性问题吗？
先把最基本的东西确定完 再来考虑是不是变inclusion body或蛋白质环境的问题吧
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◆ From: 222.156.201.242