作者iamrim (笨小孩~)
看板Biotech
标题[求救] triton X-100 solubility assay
时间Sat Nov 21 16:37:57 2009
想请问有人作过这个实验吗??
目前在这个实验trouble shooting很久....T^T
那这个实验主要目的是去决定adherens junction component
(ex:E-cad,beta-catenin...)的detergen-solubility properties.
作法:
1. cell溶在CSK-A buffer
(0.5% triton,25mM Tris-HCl,25mM NaF,10mM sodium pyrophosphate,
2mM sodium orthovanadate)+protease inhibitor
2. 放4度西摇20 min
3. 离心 14000g 10 min,4度西
4. 分sup : 加sample buffer
pellet : 溶2*sample buffer(加到与sup同体积)
5. 等量loading,跑western
以上protocol有问题吗...欢迎有作过的人提出讨论~
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