※ 引述《liuse (充实自己，提昇自己)》之铭言： : ※ 引述《anchi (我家有只可爱小都)》之铭言： : : 请问,使用lipofectamine做transfection : : 和用virus infection, 结果有何不同呢? : : 以下是我对此二方法的想法:(可能有很多错误请大家帮我指正) : : 假设我要将一个基因送入细胞株让他表现. : : 一般可选择可在真核细胞表现的vector(ex:pcDNA3)或 : : virus vector(ex:retrovirus vector)来携带此基因. : : 假设用pcDNA3携带此基因,再用lipofectamine送入细胞, : : 经过抗生素筛选一段时间,可得stable cell line. : : 如此可将此珠细胞冷冻保存,每次实验需要再取出培养. : : 假设用virus vector携带此基因,则需先送入packaging cell, : : 制造virus, 再去infection 目标cell. : : 而被感染的细胞虽然会表现此基因,但细胞被病毒感染不久後也会死亡. : : 似乎无法稳定保存. : retrovirus 有个特性你忘记罗 : 去查查看 我个人非常喜欢Nolan Lab的Tutorial，是retrovirus创始老店 http://www.stanford.edu/group/nolan/tutorials/tutorials.html 非常值得花一些时间研读。 retrovirus本身只对分裂中的细胞有感染效果 lentivirus则是广泛的对分裂、非分裂细胞都具有感染效果。 有些人会把AAV(adeno-associated virus)分类为non-integral viral system 转染效率非常高，也就是形成episome的状态，但是并不持久。 关键在於你所转殖的基因是否嵌入宿主染色体。这也是病毒感染持久的原因。 当然最近也有non-viral genomic integration 大致上是利用玉米(maze)上面发现的transposon这个玩意来做基因跳转。 : 这样你就会知道用virus infection的方式是可以稳定保存的 : 且花费的时间比用一般vector送进去挑stable clone来的短 : 所以不用再从package开始 : : 每次需要此细胞时须从vector送入packaging cell步骤开始... : : (好像没看过直接用lipofectamine直接把virus plasmid送进目标细胞株,why?) virus所包裹的plasmid就是你一开始在packaging cell line放入的。 一个病毒的内容包含gag, pol, env三个蛋白，以及内容物， 仔细看map会发现你的interested gene两端会有LTR(long terminal repeat) 那就是嵌入宿主基因的位置。 : : 这样看起来好像使用一般真核细胞表现vector的方法比较简单也比较能保存. : : 但是virus infection却也是实验是很普遍的方法. : : 请问大家这两种方法transfection的结果差异或优缺点在哪里呢? : episome: : 简单快速方便，一般P1 lab就可操作。缺点是不同cell line transfection efficiency : 会有很大差异，像一些难搞的cell line (ex:HepG2)就算用万恶的(价格上) : lipofectamine2000 效率也不大好 : virus infection: : 需要P2 lab才能操作(除非你偷做)，优点就是efficiency极好(MOI可以控制)，个人 : 推荐XD，至於你问的why那个问题，你去翻翻拿来做virus的plasmid里面的map就知道 : 原因 : 欢迎大家分享心得和补完 : : 不好意思若我有些观念错误请大家帮忙指正,谢谢! -- 宫﨑あおい命 http://photo.xuite.net/aceliang/121655/22.jpg --

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