我提共一下我解冻MCF7的protocol 给您参考一下 我养MCF7已经快一年了 这个protocol一直很好用 1. 细胞放置於37度water bath 至解冻 马上加入5ml media之中 这一步一定要快 因为细胞如果解冻的太慢极为容易死亡 2. 细胞+5ml media 再1000rpm下离心五分钟 离心後apirate上清液 仅留下细胞pellet (已去除DMSO) 3. 用5ml 的media resuspend, 之後加到t-25 flask 此时细胞一定是漂的 等24hr後再来观察 此时因该有不少细胞已经attach bottom 可以用PBS wash 掉尚未attach 的细胞(因该是死的) ※ 引述《cyin592 (矛盾是一些衣服、生活用 )》之铭言： : 之前查资料，内容有提到说MCF-7解冻初期易悬浮， : 当我解冻後24h要离心去掉DMSO， : 这时显微镜下看到的细胞都是飘的，离心後也不见有细胞被离下来， : 这样是否可以判断其实是细胞死了呢? : 我使用的medium是MEM+10%FBS+1%Pen/Strep : ※ 引述《greedman89 (天堂地狱)》之铭言： : : 依我们实验室的方法来看其实DMEM（Dulbecco's Modified Eagles Medium） : : 买Hi-D-GLUCOSE & Hi-L-glutamine的 在自行加上 1％的L-glutamine : : 还有1％的Pen/Strep 还有可以加入1％ Sodium Pyruvate : : 这样应该就可以养得起来了 : : 另外就是就算是同一家做出来的血清可是因为是不同批的关系也会造成 : : 细胞培养的差异所以像我们家的话就会尽量大量进货 : : 至於有没有污染我想Mycoplasma最好还是验一下看看用新的dish或是75T : : 随便然後拿新的medium装在里面放到培养箱放个两天然後拿去 : : 验看看会比较保险因为其本身也有些抗药性尤其是盘尼西林(penicillin) : : 还有一个考量的点就是培养基的pH值基本上都以中性为主 : : 7.2 - 7.3,可以倒一点出去用pH meter量量看基本上如果是买已经 : : 泡好的培养基那个它应该都已经调好了，但如果是要自己泡的那就 : : 要多注意一些了。不才的见解参考看看吧︿︿ -- 我的blog 欢迎参观 http://www.wretch.cc/blog/reinherd --

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