作者cyin592 (矛盾是一些衣服、生活用 )
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标题Re: [求救] 请问谁有MCF-7细胞 (台中)
时间Wed Nov 11 14:07:53 2009
之前查资料,内容有提到说MCF-7解冻初期易悬浮,
当我解冻後24h要离心去掉DMSO,
这时显微镜下看到的细胞都是飘的,离心後也不见有细胞被离下来,
这样是否可以判断其实是细胞死了呢?
我使用的medium是MEM+10%FBS+1%Pen/Strep
※ 引述《greedman89 (天堂地狱)》之铭言:
: ※ 引述《mito0222 (MISA)》之铭言:
: : 我们实验室 过去都是用High glucose DMEM+10%FBS+1% PENN/STRIP.
: : 问题是 现在解冻的都不太长 细胞型态很奇怪
: : 还会出现怪怪的东西 但是确定培养基没有污染
: : 或是分盘之後渐渐死去
: 依我们实验室的方法来看其实DMEM(Dulbecco's Modified Eagles Medium)
: 买Hi-D-GLUCOSE & Hi-L-glutamine的 在自行加上 1%的L-glutamine
: 还有1%的Pen/Strep 还有可以加入1% Sodium Pyruvate
: 这样应该就可以养得起来了
: 另外就是就算是同一家做出来的血清可是因为是不同批的关系也会造成
: 细胞培养的差异所以像我们家的话就会尽量大量进货
: 至於有没有污染我想Mycoplasma最好还是验一下看看用新的dish或是75T
: 随便然後拿新的medium装在里面放到培养箱放个两天然後拿去
: 验看看会比较保险因为其本身也有些抗药性尤其是盘尼西林(penicillin)
: 还有一个考量的点就是培养基的pH值基本上都以中性为主
: 7.2 - 7.3,可以倒一点出去用pH meter量量看基本上如果是买已经
: 泡好的培养基那个它应该都已经调好了,但如果是要自己泡的那就
: 要多注意一些了。不才的见解参考看看吧︿︿
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◆ From: 140.113.226.88
1F:推 toocool5941:解冻的步骤确定没问题吗? 11/11 19:55
2F:推 musicman:离心会对细胞造成二次伤害 这细胞不太需要马上去除DMSO 11/11 21:02
3F:推 toocool5941:嗯嗯 看了这篇感觉会是操作过程有小瑕疵 11/12 01:20