作者diploid (2倍体)
看板Biotech
标题[求救] hybridoma的问题,融不出来Orz
时间Tue Oct 13 21:36:27 2009
目前我是照着实验室的protocol做,基本上跟台大庄教授的流程差不多
不过融了快10只都出不来,快哭死了,完全都是在烧钱T口T
状况最佳的几次是在day 3~day 5左右还有数颗细胞存活,大概2,3颗聚集在一起
这些应该是有成功融出的融合瘤细胞,不过最後还是完全没继续生长&存活
目前想出的问题是
操作过程失当&无菌操作:不过以我这几次的经验我觉得完全不可能
feeder cell:不过看了很多paper,很多人在做融合时也并未使用
PEG:看了几个protocol,有人在加入PEG时会顺便搅拌一下细胞,或是静置数分钟
然後再加入media(RPMI 1640,DMEM)或PBS做wash
myeloma cell:代数过高?基因型改变?
然後有人是直接将做完PEG&wash动作後离心下来的cell pelet不打散直接移到flask培养再做分盘(分到96孔盘)
而我是加入PEG>加入RPMI 1640>离心>加HAT medium将细胞冲散>直接分装到96孔盘
这两个步骤的差异会对融合成功率产生影响吗?
有经验的高手能提供一些意见吗O_Q
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 218.35.239.132
1F：推 lovesteve:有添加hybrimore吗 如果不用feeder cell 10/14 08:37
2F：→ diploid:no,我们家没添加 10/14 15:59
3F：推 mckendri:直接去找庄荣辉老师求救比较快 他人很好 应该会帮的 11/14 02:22