作者pozin (阿焦)
看板Biotech
标题[求救] 我的PCR有问题＝ ＝
时间Fri Oct 2 15:25:11 2009
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章----
恩...是这样的
我在放大一段大约3kb的DNA片段
PCR的条件是95度C---5mins
95度C---45sec
58度C---45sec
72度C---1mins
72度C---7mins
可是放大的结果
却多一条大小大约400bp的band被我放大出来(从gel上很清楚看到）
想说可能是污染到其他东西
我把buffer等等全部换掉
再跑都是多一条band
後来想想,是primer有问题吗
可是偏偏negative control(没有加template但其他都有加)完全没有band
所以想问问大家
有可能在哪里发生问题？？？？
还是说
可以忽略那多出来的一条band,继续做下去勒？
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.154.12
1F：推 zeroking0519:miss primering?? 定序看看阿~~~ 10/02 15:27
2F：推 egoweaver:non-specific binding?如果只是要cloning的话就切胶纯化 10/02 15:28
3F：→ egoweaver:吧，接完再定序。 10/02 15:28
4F：推 howeichu:72度要不要久一点啊? 通常1K一分钟 10/02 15:36
5F：推 tsubasawolfy:同二楼 另外72度时间看polymerase 例如fusion-tag 10/02 15:57
6F：→ tsubasawolfy:在palsmid上15秒就1kb 10/02 15:58
7F：→ pozin:都忘了说是从plasmid上放大 10/03 00:03
8F：→ pozin:polymerase是Ex-Tag polymerase 10/03 00:04
9F：→ pozin:那如果我把胶切下来再做一次pcr勒 10/03 00:04
10F：推 Cmetallifer:你要不要看看你Taq一分钟做几bp啊?? 10/03 01:00
11F：→ Cmetallifer:切下来再跑 很容易糊掉喔 10/03 01:00
12F：推 singren:我倒是觉得还好耶XD" 跟2楼想法一样~ 10/08 15:27
13F：→ singren:如果真的这样就算cleanup後再P一次还会有那一条band 10/08 15:28
14F：→ singren:因为我有经验一一;; 10/08 15:29