看到这里~~ 想跟大家请教一个问题 在paper上~~常常看到跟siRNA还有一些veter的比例 都会使用N/P ratio N指的是nitro P是phospate 那在做实验时~~ 我们怎麽去作或是测量N/P ratio 还是他只是分别只N(veter)和P(siRNA)的比例罢了 ※ 引述《chxx (忍一时风平浪静!!￾ NＩ》之铭言： : ※ 引述《terrylin17 (快意)》之铭言： : : 请问各位大大 : : 我目前实验主轴是 SiRNA的transdection 作 基因knockdown的实验 : : 使用的辅助剂是用 invitrogen买的 lipofatamine2000 : : 条件基本上是抓 : : 5 ul lipo + 2.5 ul SiRNA : 这段话基本跟没说一样 : 你是在什麽plate上做的 : 是6-wll plate还是12 ,24, 96 : 或是你在dish做的? : 你要说lipofectamine占的%比较有意义 : 另外2.5uL siRNA的什麽样的浓度的stock : 你要说siRNA的final conc.是多少nM才比较有意义 : : transfection 6hr後再加入30%FBS medium : : 我是做cell culture 的 SiRNA knockdown : : 但是knockdown的效果并不是很稳定..... : 你是说你每次transfection完都做western或qPCR : 然後Knock down的程度都不同吗 : : 但是我又不能再换其他种的transfect方法 : : 请问有人也有做过类似的实验吗 ? : : 请教各位了 谢谢 : 我对lipofectamine有点感冒 : 你可以试试Dharmacon的HiPerfect reagent : 他总共有四种 网站上的manuel有适合的Cell line的资料 : 你可以试试 : 我之前对某一种rat 的beta-cell line做transfection : Dharmacon的可以多knock down 20% (同一个siRNA) --

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