※ 引述《nau9231 (nau9231)》之铭言： : 我拿到一个新的嗜热菌菌种。 : 我用快筛知道它里面酯解酵素(esterase)有很好的效果!! : 可是它是新的菌种,基因序列都还未被定序出来。也就是说它是一个未知的序列。 : 所以现在我不知道要如何取我感兴趣的基因片段( 酯解酵素 )。 : 用限制?酵素去切吗?? : 可是限制?酵素必须知道自己的基因序列才可以知道用哪种限制?去切。。 : 可以给我一些建议吗??我该如何把我要的基因片段拿出来呢!! 是要将基因放大出来放到别的物种表现这个蛋白质吗？？ 如果你想知道这个序列长相，唯有将这段基因选殖出来 要作到表现，可能就要需要完整的基因序列 基因的选殖个人认为很靠运气啦～下面跟你说有哪些方法可以知道 首先当然就是要先到NCBI搜寻相似物种蛋白质之胺基酸序列， 多找几个，再进行alignment，当然物种蛋白越相似越好 再来针对conserve region设计degenerate primer 再PCR放大部份片段（template是chromosome） 再来呢，将这个片段定序後得到此基因部份序列的长相 接着，以不同限制酵素切割你的chromosome 接下来你有两种选择 1. inverse PCR 2. 小范围的genomic library: southern hybridization -->部份纯化-->cloning---> colony hybridization 或一个一个挑起来check (by PCR...) 如果此酵素表现後，有很快速的方法可以知道他的存在 那麽clone就会比较好挑 以上是我知道的方法 若有更简单的方法请版友补充 XD --

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