作者kotenka (Egg Dance)
看板Biotech
标题Re: [求救] 免疫萤光染色
时间Sat Sep 12 03:05:05 2009
原PO辛苦了，先恭喜你改善染色结果
我也分享一下我染色的步骤，较为简单省时
1. acetone fix 10 for mins(非pre-cooled，也只在室温作用)
2. PBS wash for 5 mins * 3 times
3. 10% serum in PBS for 30 mins at RT
4. primary Ab(in 2% serum) 1 hr at RT or 4度C overnight
5. PBS wash
6. secondary Ab(in 2% serum) 1 hr at RT
7. PBS wash
8. nuclei counterstain
9. PBS wash
10.mount
在我参考的书籍中，有些步骤也加入了Triton X-100
但後来发现会使讯号减弱，所以我都省略掉 (因为我比较常碰到的问题是染不到)
我染的是T cell surface markers或一些tissue-specific antigen及viral antigen
目前在我手上，用这样的染色步骤，大部分都可以染出来
供您参考，有错误还麻烦大家指正
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 218.169.90.171